【摘 要】為了制備無(wú)細(xì)胞百日咳效價(jià)測(cè)定用攻擊菌并用液氮進(jìn)行保存,對(duì)此方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用原代攻擊菌復(fù)蘇傳代后測(cè)定細(xì)菌濃度,并用蛋白胨水稀釋為27億個(gè)菌/ml,分裝凍存管中。放入液氮罐內(nèi),并對(duì)液氮保存的攻擊菌進(jìn)行相應(yīng)的檢測(cè),用統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算。結(jié)果顯示,此方法制備的攻擊菌與傳統(tǒng)的攻擊菌無(wú)顯著性差異,凍后雖攻擊菌的毒力有所下降,但都在100~1000/MLD的正常范圍內(nèi),且凍后0、3、6、9、12月無(wú)顯著性差異。同批支間差異小,CV<5% 。通過(guò)此方法制備的攻擊菌穩(wěn)定性好,試驗(yàn)結(jié)果符合《中華人民共和國(guó)藥典》要求,可用于無(wú)細(xì)胞百日咳的效價(jià)測(cè)定。
【關(guān)鍵詞】無(wú)細(xì)胞百日咳攻擊菌;液氮保存;方法分析
自增壓液氮罐
作為無(wú)細(xì)胞百日咳效價(jià)測(cè)定攻擊用的菌種,長(zhǎng)期以來(lái)都是每次試驗(yàn)前現(xiàn)開(kāi)菌種的方式,這樣既麻煩,又浪費(fèi)菌種,還有可能造成批間的效力試驗(yàn)差異很大。甚至可能因攻擊菌不成立,導(dǎo)致試驗(yàn)失敗。這樣浪費(fèi)動(dòng)物、人力、時(shí)間。
為此,實(shí)驗(yàn)用事先制備攻擊菌低溫保存的方法來(lái)解決這些問(wèn)題。制備及保存微生物具有容易變異的特性,因此在保藏過(guò)程中,必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài),才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力,Mery-man(1956)曾引證在-130℃將無(wú)生化活性發(fā)生。據(jù)此可采用液氮保存攻擊菌。
自增壓液氮罐