沒有液氮罐如何凍存細胞?不用液氮罐，在冰箱如何凍存4度/-20度/-70度各放多久啊?

　　如果不用液氮罐，可以用-70。我們是這樣做的，將細胞轉(zhuǎn)移至凍存管中，在-20放置半小時到一小時左右，預凍。之后放入-70中，我們嘗試過載-70中放置1年的細胞沒有問題，復蘇之后狀態(tài)尚佳。至于更長時間我們沒有嘗試過，但是老板說1年半沒問題，在國外他試過。

　　細胞凍遵循：慢凍速溶的原則。

　　還可以拿毛巾包著凍存管就可以直接放進-70，即可以遵循細胞凍慢凍速溶的原則，又比較方便，不用先放-20，因為是慢慢凍進去的，所以能更好的達到梯度凍存。

　　實際上，我認為慢凍速溶原則是正確的。

　　慢凍是要給DMSO以滲透入細胞的時間，所以我的經(jīng)驗是4度的半小時要保證，之后就基本上可以馬上凍起來也沒有什么關(guān)系了。

　　毛巾包裹法十分新穎，呵呵。不過，從原理上看，確實是值得嘗試的好方法，既保證了時間，又省去了搬來搬去的麻煩。

　　至于-80度的保存時間，我親眼所見，半年絕對沒有問題。

　　在4度的情況下，要看你是什么細胞了，如果是老鼠的細胞可以放1小時左右，其他細胞最多半小時(本人做過試驗的);在-20度的情況下，老鼠的可以放1天左右，其他細胞半天，但其狀態(tài)不是很好了;在-70度的情況下，老鼠的細胞可以放1到2年，在此期間要復蘇一次看其生長情況，其他細胞最多一年了!

　　1. 選用對數(shù)生長期細胞，在收集細胞24小時前換液一次。

　　2. 用常規(guī)方法將細胞消化下來，按(1～5)×106/ml濃度、懸浮于含有10% DMSO的小牛血清或生長液中。凍存的細胞數(shù)量要充分，因復蘇時接種的細胞數(shù)量應比平常多一些。

　　3. 用吸管吸取細胞懸液，分裝于無菌安培管中(沒管1ml)，嚴密封口，放入三層紗布小袋，注明細胞名稱和凍存時間，便于以后查找。

　　4. 凍存 當前已有專用細胞凍存器，能精確地控制凍存溫度。在無凍存器的情況下，可用手工方法。從把安培懸液在液氮容器口開始，在30～40min內(nèi)，下降到液氮表面，在停30min后，直接投入液氮中。或先將安培移入液氮罐口頸部氣相中過夜，次日將紗布袋緩慢下降至液氮中，歷時3分鐘。在液氮中可長期保存。 若沒有液氮，可存于-80冰箱內(nèi)，不過注意保存時間，比液氮短，可保存3個月左右。